Gwen Stacy, nacida en la Tierra-65, es la hija de George y Helen Stacy y fue criada sola por su padre, que solía recluirse en silencio. Entabló amistad con Peter Parker, con quien compartía su amor por la música. En el instituto Midtown, Gwen formó la banda Las Mary Janes y entabló relación con Harry Osborn. Tras ser mordida por una araña creada genéticamente, Gwen recibió superpoderes arácnidos y comenzó una carrera como luchadora contra el crimen, apodada por los medios como Spider-Woman.

Una de las mayores tragedias en la vida de Gwen fue cuando Peter, desesperado por ser especial como su ídolo Spider-Woman, se convirtió en una criatura parecida a un Lagarto. Gwen luchó contra él, pero murió debido a las heridas sufridas durante sus ataques. George, el padre de Gwen, recibió el encargo de dirigir la investigación de la policía de Nueva York para capturar a Spider-Woman, acusada de ello, lo que llevó a Matt Murdock, un abogado corrupto y líder de la secta ninja de la Mano, a enviar al sicario Aleksei Sytsevich para matar a George. Después de salvarle, Gwen fue retenida a punta de pistola por su padre y se vio obligada a revelar su identidad y declararse inocente.

Gwen se unió al ejército arácnido de Spider UK para combatir a los Herederos durante la Gran Caza. Fue enviada a Tierra-21205 para reclutar al al Peter de allí, convertido en el Duende, pero fue asesinado por la heredera Verna y sus Sabuesos. Con la destrucción del universo, Gwen se encontró en la Tierra-15513 bajo el supuesto alias de Ms. Woodley, formando equipo con Peter Porker, Anya Corazon, William Braddock, Pavitr Prabhakar y Peter Parker.

En otra de las sierras paralelas, la TRN461, se opuso a la Ley de Registro de Superhumanos y se unió a los Vengadores Secretos de Peter Parker cuando fue asaltada por agentes de S.H.I.E.L.D. El director Furia ofreció a Gwen una nueva propuesta, que consistía en hacer tratos especializados con los héroes en lugar de obligarlos a ponerse de su lado. Gwen convenció a Spider-Punk para que se registrara y persuadió a Thompson para que perdonara a Furia y se uniera a él.

En su nuevo trabajo en la bodega Dollar Dog, Gwen se encontró con otro Lagarto, el Dr. Curtis Connors, que había desaparecido tras la muerte de Peter. La Capitana América intervino, revelando que los monstruos eran propiedad de S.H.I.E.L.D. y poniendo a Gwen bajo arresto. Gwen se vio forzada a una batalla a tres bandas con los Lagartos y fue noqueada. La Capitana América la acusó de pertenecer a la organización terrorista S.E.D.A. Finalmente, Gwen derrotó a Connors con la ayuda de la Capitana América y de Jean DeWolff, una policía amiga de su padre.

Al visitar a la Spider-Woman de la Tierra-616 utilizando su dispositivo de portal de los guerreros arácnidos, Gwen le preguntó cómo era su homóloga de Tierra-616. Jessica le aconsejó que se centrara en ser la mujer que era y convertirse en la mejor Gwen Stacy que pudiera ser, en lugar de pensar en lo que le había pasado a la Gwen de la Tierra-616 y al Peter de la Tierra-65.

Al regresar a Tierra-65, Gwen descubrió que Harry Osborn, un amigo de instituto suyo y de Peter, había vuelto después de dos años. Harry se culpó por la muerte de Peter y desertó a S.E.D.A. para vengarse. Gwen intentó convencer a Harry, pero éste bebió una versión mejorada del suero del Lagarto para ganar ventaja sobre ella. Gwen consiguió convencer a Harry, dándole el supresor del suero para revertir su mutación.

Más tarde fue atacada por el Super-Adaptoide mientras se encontraba con las Spider-Woman y Seda de la Tierra-616 en la Tierra-65. Más tarde salvó a Spider-Woman y a Reed Richards de una emboscada de los agentes de S.E.D.A., dirigidos por la variante de Tierra-65 de Cindy Moon. Cindy-65 reveló que había creado una araña que otorgaba a Gwen sus poderes, derivados del material genético de un arácnido extraterrestre. Tras incapacitar a Gwen, Cindy la inyectó una fórmula que le arrebató sus poderes.

Cuando Gwen descubrió de la historia del origen de Jesse Drew y le informó del engaño de Cindy-65, éste desertó de S.E.D.A. y proporcionó a Gwen isótopos radiactivos derivados del ADN de las arañas alienígenas que le habían mordido, lo que le permitió recuperar temporalmente sus poderes. Sin embargo, Gwen se dio cuenta de lo indefensa que estaba sin sus poderes y se deprimió ante la perspectiva de perderlos permanentemente una vez agotados sus ocho cargas.

Gwen pidió consejo a Jesse, quien le dijo que cogiera a su padre y huyera, considerando la posibilidad de buscar refugio en Tierra-616 o la ayuda de sus diversos aliados. Tras recibir un discurso sorprendentemente inspirador del Bandido de Bodega, Gwen decidió luchar e hizo que Reed Richards reparara el inyector, utilizando la última de las cargas de isótopos para luchar contra el Castigador de su tierra. Su padre y Jean DeWolfe llegaron a tiempo para impedir que matara a Gwen con su guantelete de Máquina de Guerra.

Matt Murdock, Kingpin, se acercó a Gwen con una oferta, a cambio de la lealtad de Spider-Woman, y Gwen aceptó, desesperada por conseguir representación legal para su padre, acusado de encubrirla. En Nochebuena, Murdock ofreció a Gwen un suministro ilimitado de muestras de isótopos, convirtiéndole en la “única esperanza de Gwen para ser Spider-Woman”.

Cuando el padre de Miles Morales desapareció de Tierra-616 y fue encontrado en Tierra-65, Gwen se unió a Miles y descubrió que el homólogo de su padre en aquella tierra era el agente de campo de S.E.D.A. conocido como El Escorpión. Miles y Gwen entablaron una relación romántica, pero se vieron obligados a separarse.

Con la revelación de que el corrupto fiscal del distrito Foggy Nelson había adelantado la fecha del juicio de su padre, la vida de Gwen se descontroló. Se reunió con Murdock en Oscorp, quien le reveló una forma de recuperar permanentemente sus poderes y curar a Harry Osborn. Cuando Harry se transformó por completo en el Lagarto, Gwen se unió a Gata Sombra y Logan un par de caza recompensas, usando sus isótopos para convertir el suero del Lagarto en las venas de Harry en el simbionte Veneno con el que acabó fusionándose.

Con el tiempo Gwen se volvió cada vez más violenta a medida que crecía la influencia del simbionte sobre ella. Se enfrentó a Murdock y a Rino y juró ir a por Kingpin cuando hubiera acabado con el hombre que hirió a su padre. Sin embargo, Gwen se dio cuenta de que la estaban grabando para desacreditar a su padre cuando intervino el Castigador y la separó del simbionte usando su guantelete sónico antes de matar al propio Rino. Enfurecida por el robo de su venganza, Gwen se volvió a fusionar con el simbionte y fue inculpada por el asesinato del Rino.

Tras atacar brutalmente y casi matar al Bandido de Bodega, Gwen pidió ayuda a Reed Richard y Cindy Moon para controlar a Veneno y enfrentarse a ella por su uso de la araña mutante. Cindy la reveló que los oscuros pensamientos, la ira y la búsqueda de venganza de Gwen no son el resultado de Veneno, sino suyos propios. La determinación de Gwen de acabar con Kingpin se renovó después de ver cómo Felicia Hardy era encerrada en la prisión de máxima seguridad de S.H.I.E.L.D..

Gwen intentó matar a Murdock, pero se enfrentó de nuevo al Castigador, quien le ofreció la oportunidad de redimirse entregándose. Gwen reveló entonces su doble identidad a May y a las Mary Janes, confesando su culpabilidad por haberles ocultado su vida durante tanto tiempo. Las compañeras de Gwen quedaron conmocionadas pero la apoyaron, aunque Ben la animó a continuar con su plan de venganza contra Murdock.

Gwen se lanzó a la azotea del edificio de Murdock, donde un ensangrentado y desaliñado Castigador le estaba apuntando con su guantelete de Máquina de Guerra. La Capitana América entró corriendo y desarmó a Castle, prometiendo a Gwen que Murdock vería la justicia. Gwen dominó a la Capi, la rompió el brazo y la dejó inconsciente.

Más tarde Gwen-617 se encontró con éste Gwen, quien inicialmente supuso que Gwen-617 era un clon. Tras enterarse de que el padre de Gwen-617 había sido asesinado, Gwen-65 se dio cuenta de que al menos su propio padre seguía vivo y debería haberse quedado con él en lugar de ceder a su rabia.

Con la ayuda de Reed Richards y las Mary Janes, Gwen elaboró un plan para acabar con Murdock y recuperar su brazalete arácnido. Enfrentándose a Murdock, que había sido considerado un estorbo por La Mano, Gwen se declaró libre de sus maquinaciones y transformó a Veneno en una réplica de su antiguo traje.

Gwen, fue arrestada por la detective Jean DeWolff y condenada a un año en una prisión de máxima seguridad de S.H.I.E.L.D.. A pesar de su indulgente sentencia, Gwen fue brutalmente golpeada por las otras reclusas y atormentada psicológicamente por el Buitre. La Capitana América le ofreció su liberación si se unía a un equipo de operaciones encubiertas formado por activos potenciales como Gata Negra, Seda, Kitty Pryde, Logan y el Castigador.

Tras un año en prisión, Gwen se reunió con las Mary Janes e inicialmente vetó la sugerencia de Betty Brant de que el grupo se fuera de gira y usara eso como excusa para que Spider-Gwen ayudara a la gente en lugares fuera de Nueva York. Cuando el Octopus Superior utilizó la tecnología de clonación de los Herederos y se fusionó con la Nueva Tecnología U para hacerse inmortal, los guerreros arácnidos decidieron volver a reunir al ejército arácnido para detenerlo.

Gwen fue abordada por Spider-Ham y se unió al resto, y por último reclutaron a Miles Morales. Llegaron a la guarida de Otto, donde presenciaron cómo Spider-Noir se suicidaba y cómo la energía vital de Spider-UK era absorbida por los Herederos. Verna consiguió entonces el brazalete dimensional de Gwen y la envió a otra dimensión, donde conoció a una versión alternativa de sí misma que se había convertido en la Duende Verde. Peter y Mary Jane explicaron lo sucedido y revelaron que la Gwen Stacy de ese mundo estaba trabajando en un proyecto para hacer que Harry Osborn viajara entre dimensiones con sus Spider-Poderes, demostrando que podía ayudar a Spider-Gwen a volver con sus amigos.

En lugar de regresar a San Francisco, Gwen decidió reclutar a todos los totems arácnidos que pudiera. Llegó a la Pirámide Transamérica justo a tiempo para ver a Miles, ahora con el poder de la Fuerza Enigma, luchar con el revivido padre de los Herederos, Solus. Tras ser asesinados y derrotados, crearon nuevos cuerpos de bebés clones de los Herederos, que fueron adoptados por Spider-Ma’am. Con la Red de la Vida y el Destino destruida, Gwen era la única que podía viajar por el Multiverso.

Gwen tuvo que luchar contra el dios primigenio Knull y sus simbiontes. Cuando Knull atacó la Tierra, Gwen descubrió que su simbionte se veía afectado por su sed de sangre, lo que provocó que se transformara en su forma venomizada. Intentó regresar a la Tierra-65 utilizando su Billete al Multiverso, pero en ese mismo momento, en su tierra, el Chacal fusionó un pedazo del simbionte artificial de Gwen a Mary Jane, que fue teleportada al Universo Marvel principal a través de su simbionte compartido. Gwen, trató de salvarla, pero MJ fue sometida por un simbionte que se fusionó con la parte del simbionte artificial de Gwen, y fue nombrada Matanza por Knull, quien la ordenó matar a Gwen y llevarle su simbionte artificial.

Gwen persiguió a Matanza, impidiendo que dañara a civiles y retándola a una batalla de bandas. Las ondas sonoras desestabilizaron el simbionte mezclado de Matanza, lo que permitió a Gwen reafirmar el control sobre la parte de su simbionte unida a MJ. Cuando MJ perdió el conocimiento a causa de la radiación, Gwen se comprometió a mantenerla a salvo y a encontrar la forma de que ambas volvieran a casa sin darse cuenta de que parte de Matanza seguía vinculado a ella.

Juntas regresaron a Tierra-65, donde Gwen resolvió la situación con los gemelos Storm, rescató a sus amigas del Chacal y reanudó sus deberes como superheroína y miembro de las Mary Janes. Sin embargo, Gwen fue alcanzada por un pulso de energía temporal mientras intentaba utilizar el Billete al Multiverso y cayó a través de un portal. Gwen y Spider-Zero fueron llevados al Mundo Telar, donde se enteraron de que la Tierra-65 había sido reescrita y que, para restaurarla, Gwen debía reunir versiones alternativas de sí misma y recombinarse con ellas antes de que los cambios en la línea temporal fueran permanentes.

Gwen se encontró con Thorgwen, la diosa del trueno, Gwen Rogers, la Capitana América, y Gwen Howlett, Lobezna. Juntas fueron a por Toni Stacy, Iron Gwen. Eventualmente consiguió un trabajo a tiempo parcial en una tienda de batidos, donde conoció a Mateo, un chico del que se enamoró. Bajo el alias de Ghost-Spider luchó contra los Seis Siniestros de Tierra-616, que atacaron a Gwen en su dimensión antes de enviarlos con éxito de vuelta a su universo. Luego fueron atacados por una versión de Gwen hecha de arena, a la que las otras Gwen liberaron de su dispositivo de control.

Lyla Bennett planeó activar una máquina que mataría a todas las versiones de Gwen Stacy del multiverso como venganza por la muerte de su marido Lee. Gwen y la Gwen de Arena salvaron a las otras Gwens, y cada una de ellas abandonó a Ghost Spider para encontrar su propio camino en la vida.

Gwen empezó a sentir que ya no pertenecía a Tierra-65 y que las Mary Janes eran lo único que la mantenía anclada allí. Se enteró de que habían pedido a las Mary Janes que lideraran la nueva banda de rock Uncut Gems, encabezada por Dazzler (Alison Blaire). MJ se ofreció a readmitirla como batería de la banda con la condición de que no se metiera en ninguna superheroicidad. Sin embargo, pronto se supo que la oferta era una estratagema de la mánager de Uncut Gems, la superespía Natasha Romanoff, para conseguir que Ghost Spider sirviera de guardaespaldas a Alison, que estaba en el punto de mira de supervillanos como Hulk. Gwen accedió a proteger a Alison, enfureciendo a MJ en el proceso.

Cuando las Mary Janes terminaron su gira, el simbionte Matanza que permanecía unido a MJ, empezó a apoderarse de ella y a atacar a Gwen cada vez que se enfadaba. Orlando Octavius reclamó la propiedad del simbionte Matanza por haber financiado la investigación gamma del Dr. Banner, intentando secuestrar a MJ. Gwen buscó ayuda en Natasha, pero fue incapacitada por Matanza que quería una conversación para resolver sus sentimientos por ella.

Gwen intentó llevar a MJ a un lugar seguro antes de ser atacada por Mysterio. Tras derrotarlo fácilmente, Matanza llevó a Gwen hasta donde Natasha la esperaba con un helicóptero. Gwen se sintió desolada al enterarse de que MJ había aceptado unirse a la agencia de superespionaje de Natasha para aprender a trabajar junto a su simbionte.

Gwen se vio obligada a abandonar Tierra-65 tras ser atacada por criaturas sobrenaturales parecidas a cuervos y ser rescatada por Ouroboros, de la Autoridad de Variación Temporal. Trasladada a Tierra-616 bajo el alias de Lisa Rogers, Gwen recibió instrucciones de pasar desapercibida, no luchar contra el crimen y no dejar que ninguno de sus aliados supiera que había regresado. No duraría mucho y poco después se unió a la Sociedad Araña que estaban formando Spiderman 2099 y Anya Corazon.